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雙熒光素酶實驗

實驗原理

        熒光素酶報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀(化學發光儀)測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。

        雙熒光素酶體系,即有兩種熒光素酶,比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而海腎熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。以其中一個作為內參對照,即表達量基本恒定,用于減少試驗中不同處理間所固有的變化,包括培養細胞的數目及活力的差異,細胞轉染及裂解的效率,而另外一個熒光素酶則作為報告基因,用于指示不同處理條件下基因的表達情況。


實驗應用:

潛在啟動子/啟動子核心區域檢測;

潛在增強子/抑制子等調控子核心元件檢測;

啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測;

啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用;

病毒/細胞相互作用;

藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或增強);

射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或增強);

microRNA靶基因驗證。

以雙熒光素酶實驗進行microRNA靶基因驗證為例,介紹相關的實驗流程。


實驗流程
服務提示

1.  請參考細胞收樣注意事項

2.  請告知相關的基因信息(名稱、序列、ID等)

3.  巴菲爾生物提供標準實驗流程報告、相關的實驗圖片、實驗數據等。

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